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苏云金芽孢杆菌(Bt)乳液的工业生产技术

* 来源: * 作者: * 发表时间: 2019-12-10 1:15:17 * 浏览: 0
一,概述Bt是苏云金芽孢杆菌的缩写。它是一种芽孢杆菌。那会产生寄生虫的寄生虫,并导致昆虫发病和死亡。其制剂被广泛用于农业,农业,水果,蔬菜和城市花园。除害虫。二,生产过程操作规程(一)沙土块茎的制备1.制砂处理:取建筑砂或河砂,用60-80目筛过,浸入工业Hc中48h,用水洗涤,再用0.2洗涤NNao被中和了。干燥后,用磁铁去除磁性金属颗粒,并将其放入干净的容器中以备后用。 2.沙土管的制备:将处理过的沙土分散到1.2×12厘米的小试管中。每个试管约2克,用棉塞塞好,然后以2.0 kg / cm2的压力灭菌1.5小时。间歇消毒3次,然后在160°C下干热消毒2小时。无菌测试后,取样一点沙子,并将其放在36°C的倾斜采访管中放置24小时,然后检查是否没有细菌。 3.产沙孢子:选择生长良好并通过生产能力测试的优质试管,向芽孢中加入1 ml无菌水,用接种针刮擦芽孢以制成高浓度芽孢悬液,并用无菌吸管吸。将0.2-0.3ml放入沙管中,然后置于真空干燥器中,用真空泵间歇干燥,用石蜡密封,然后置于0-5°C的冰箱中并在干燥条件下保存。 (二)斜菌株的制备1.培养基:牛肉糊0.3%,蛋白1 1%,琼脂2%,调节至7.5-8.0,溶解并等分到试管中,将塞子塞入试管篮中,并包装以灭菌。 2.灭菌:在灭菌器中以1.1kg / cm2蒸汽灭菌30分钟,等待其冷却至60-70°C,将其取出并放在倾斜的表面上。 3.接种培养:将细菌的斜管放在接种室或无菌操作箱中,打开紫外线灯30分钟,然后将其关闭。根据操作步骤,使用接种环刮去少许种子细菌苔藓,转移到新鲜的倾斜培养基上进行划线,然后将其放在30°C的培养箱中放置3-4天。检查是否正常后,将其放入冰箱中使用。 (3)在扁瓶中扩大种子制备1.培养基:与斜培养物相同的成分,加1%葡萄糖溶解在扁瓶中。 2.灭菌,接种和培养与斜菌株相同。 (四)发酵1.培养基中棉籽饼粉3.5%,玉米粉2.0%,鱼粉1.0%,酵母粉0.2%,CaCO30.1%,起泡敌人0.03%,将NoaH的pH调节至8.5,并灭菌至7.0。 2.灭菌:发酵罐进料前应清洗干净,并按50%的进料系数进料。子过滤器在2kg / cm2的温度下灭菌30分钟,实际水箱在1.1kg / cm2的温度下灭菌,水箱温度为121-125°C。 3.孢子悬浮液的制备:取3至4个栽培的扁瓶种子,加无菌水,将细菌苔藓洗成悬浮液,然后用注射针将其倒入接种瓶中。将该孢子悬浮液在75℃的水浴中处理20分钟。 4.接种:使用压力差将孢子悬浮液通过发酵罐的接种孔注入发酵罐。 5.栽培:罐内压力保持在0.3-0.5 kg / cm2,搅拌为220 rpm,接种前4小时通风量较小,并逐渐增加到1:1,温度为30°C ±1°C。在上述条件下,细菌的生长和发育时期为:0-4小时,调整的生长时期,5-12小时,生长和繁殖时期,13-20小时,孢子晶体形成时期,21-释放罐,孢子晶体成熟期。 6.检测:培养过程中的4,8,12,16,20。取每个样品以测试生长和pH值。取最后一个样品以确定细菌数。 (5)发酵液的后处理1.用工业盐酸将发酵的发酵液的pH值调节到5.0-6.5。 2.使用薄膜浓缩器(或离心机)进行真空浓缩离子。 3.检测:根据发酵液中的细菌数和浓度倍数,样品中的细菌数估计为每毫升100亿,当检测达到产品质量标准时可以终止浓度,然后压入储水箱。 4.添加剂:按规定加入1%NaCl和0.3%苯甲酸钠并充分搅拌。 5,成品检验:(1)经质量检验部门检验符合产品质量标准的成品,发出包装通知。 (2)包装:装在1升的塑料瓶中,有内,外盖,不泄漏。包装应符合产品库存,处理和运输的技术和安全要求。包装盒中应包含产品证书和说明手册。 4. Bt乳剂主要生产设备清单:附件一:Bt乳剂质量检验方法:A,Bt乳剂的孢子数测定:A1原理在光学显微镜下用血细胞计数板计数孢子数,然后使用公式来计算每1毫升产品中包含的孢子数。 A2仪器血细胞计数板,光学显微镜等。A3操作A3·1晶体处理摇动待测样品后,迅速吸取10 ml的等量0.5N NaoH溶液,间歇摇动,处理1次。 -2小时,以便所有晶体都自动溶解,直到通过显微镜检测不到晶体为止。 。将A3·2稀释在500毫升三角瓶中(内有玻璃珠),将其充满99.5毫升无菌水,摇晃NaoH处理的样品,然后用移液管迅速将0.5毫升A3·2吸到三角瓶中。共400次))。对于A3·3载玻片,请从已摇匀的400倍稀释溶液中抽一点,然后将其从盖玻片的一端注入血细胞计数板,以使细菌溶液渗入载玻片之间,然后使用滤纸以沥干多余的东西。细菌液体,血细胞计数板在操作过程中不得产生气泡,否则应重做。数15分钟。 A3·4观察读出孢子的数量,并用低倍显微镜观察。使用25×16计数板计算四个中间正方形中的孢子数量,四个角落中部中间的孢子数量,然后转换为1 ml细菌溶液中的孢子总数。 A4计算每1毫升产品的孢子数,计算方法如下:A = B×C×5×104其中A是1毫升细菌溶液中的孢子数(亿/毫升)。样品。 B是五个中国方格中的孢子总数。 C是稀释因子。 5×104是常数,即血细胞计数板每个细胞体积中的细菌数转换为1 ml中的细菌数。注意:如果使用16×25血细胞计数板进行计数,请使用以下公式计算:A = B×C×3.2×104B,Bt乳剂和毒性作用的测定:B1测试昆虫的采集:人工繁殖或田间采集(在具体在同一区域内的同一植物上采集,具有相同的年龄(一或两龄),并且健康昆虫(常见的卷心菜蠕虫,但要避免接受未喷洒的农作物)的生长和发育良好,请在室内观察1 -2天后备用。 B2洗净所有餐具,用1kg / cm2的蒸汽消毒30分钟,然后备用。 B3操作B3·1将样品稀释500、1000、1500、2000次,并为每个浓度设置3个重复样品。 B3·2使用300px培养皿或罐头瓶作为容器,其中放入2-3片白菜叶,并将细菌溶液涂在蔬菜片(前后)上,然后干燥,然后第二至第二龄的白菜蠕虫20至25个,同时设一个对照组。 B3·3在27-28℃光照下饲养试验幼虫。 B4结果记录在测试后24、48和72小时观察并记录死亡和活的昆虫的数量和and的数量。观察结果列于下表。根据以下公式计算72小时的白菜蠕虫死亡率:蠕虫死亡率(%)=×100被测昆虫注1:在计算和统计中在过程中,化学蠕虫的数量不参与死亡率的计算。注2:如果对照组的死亡率≥5%,则应校正死亡率。校正方法如下:对照组中活虫数-校正后的活体死亡率(%)=×100活虫3:如果没有白菜虫,可以用第二龄幼虫代替。蚕,测试方法不变。 C,PH值测量:使用精密的pH试纸。附件2:Bt制备说明手册[简介]该产品是高效微生物农药。它对人类和动物无害,不伤害天敌,没有污染,而且价格便宜。它可以广泛用于农业,森林,水果,蔬菜和城市花园的害虫防治。它对建立无公害的蔬菜,烟草和茶叶经济作物种植区具有极好的推广价值。实践证明,我厂生产的Bt乳剂不仅具有明显的杀虫作用,而且有效期长,并带来了广泛的社会效益和生产效益。它可以完全替代某些剧毒农药,例如氨基磷酰胺钾。 [性状]液体剂型(浓稠,乳状液体)[规格]每毫升的孢子数超过100亿,孢子比为1:1。[用途]亩数通常为2雄性。低水喷雾。详细信息请参见下表:注意:(1)添加少量化学农药可以提高效率,(2)本产品有效期一年。避免接触热源